免疫共沉淀(Co-IP)

(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

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免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用

的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被

裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,

那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。

目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上

的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合,也可用于确定

一种特定蛋白质的新的作用搭档。

co-ip图.png

Co-IP的原理与免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)大致相似,都由特异抗体与待检样品中相应的特异抗原结合

形成抗原一抗体免疫复合物,然后复合物吸附于固化了蛋白A或G的支持物上(蛋白A或G具有吸附抗体的能力),

相应的抗原分子也同时被吸附。免疫复合物被吸附到支持物上的过程即为沉淀(Precipitation)。没有被沉淀的

蛋白质随着缓冲液的流洗而被除去。但在免疫共沉淀中,与靶抗原一起被沉淀的还有靶抗原的相互作用蛋白质,

即随着抗体被吸附于固化了蛋白A或G的支持物上,相应的抗原及其相互作用蛋白质也同时被沉淀。最后,采用

相互作用蛋白质的特异抗体经Western Blot检测,以证实二者存在相互作用。

结果内容:整理好的报告